Опыт использования метода ГРВ-графии для определения резус фактора и групп крови человека по системе АВО

Ахметели Г.Г.*, Баранова Т.Н.**, Короткина С.А.***, Пахомова К.С.****
*ВМедА, **НИИ Кардиологии, ***НОА «КТИ», ****СПбГМУ

Введение
  В работах, опубликованных в конце ХХ века, заметно нарастание остроты вопросов о побочных реакциях и осложнениях гемотрансфузии.
  Анализ 766 случаев гемотрансфузионных осложнений, возникших у больных в различных лечебных учреждениях до 1986 г. показал, что 81,6% из них были связаны с переливанием несовместимой группы крови (35,8% по группам системы АВО, 42,8%-по резус фактору, 3%-по антигенам других систем). (1)
  В гематологическом научном центре РАМН последние результаты исследований в 2000 г. еще более драматичны: 90,7% осложнений были связаны с несовместимостью (61,7% по системе АВ0, 19,6%-по резус фактору, 2% по антигенам других систем), остальные 7,3% осложнений были не иммунной природы. Анализ этих осложнений нередко показывал отсутствие у врачей элементарных сведений в области серологии (2).
  Кроме того, что антигенный состав крови играет ведущую роль в вопросах трансфузиологии, он имеет огромное значение в других областях медицины и жизнедеятельности человека как биологического вида. Так группа крови А(II) чаще встречается у больных пневмонией, при сепсисе, гриппе, раке молочной железы. У них чаще отмечается низкий уровень интерферона, обеспечивающего противовирусную и противоопухолевую защиту. Частота лиц групп В(III) выше среди больных с патологиями ЖКТ. Среди больных, страдающих язвой желудка и двенадцатиперстной кишки, на 10-12% повышена частота лиц группы 0(I). Резус-отрицательные люди более склонны к гуморальному, резус-положительные – клеточному типу иммунного ответа. (3). Привлекает внимание и склонность исследуемых к алкогольной зависимости по их принадлежности к различным группам крови: 57% в 0(I) и 100% - АВ(IV) группе. (4).
  Понятно почему так важна точность при определении принадлежности человека к той или иной группе крови. Однако проведение предтрансфузионных иммуногематологических тестов современными высокочувствительными и быстрыми в исполнении методами не исключают ошибок и неверных результатов. Причин тому несколько: краевая, холодовая и бактериальная агглютинации; панагглютинация, при наличии патологических процессов или отсутствие агглютинации в силу различных причин (неправильное соотношение реагентов, несоблюдение условий реакции, использование старых реактивов и др.).(2).
  Потому-то так важна разработка новых вспомогательных высокочувствительных  методов, подтверждающих или опровергающих серологически полученный результат.  
Ранее нами было установлено, что реакция агглютинации регистрируется с помощью метода ГРВ (5).
Цель исследования.  Обосновать возможность применения ГРВ-графии, как вспомогательного метода, в серологической практике для определения групп крови в системе АВ0 и резус фактора.

Материалы и методы
  Для определения групп крови человека по системе АВ0 применялись цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ диагностические жидкие (антитела моноклональные анти-А, анти-В, анти-АВ).
  Для выявления D антигена системы резус в эритроцитах человека использовался эритротест-цоликлон анти-D супер. В связи с тем, что IgM антитела не вызывают агглютинации некоторых образцов эритроцитов со слабовыраженным D антигеном, образцы донорской крови, которые при исследовании цоликлоном анти-D супер были определены как D отрицательные, дополнительно тестировались в НИИ Кардиологии с помощью анти-D реагентов, содержащих IgG антитела (поликлональной сывороткой или моноклональным анти-D IgG реагентом).
   В опытах для забора крови использовались пробирки с антикоагулянтом ЭДТА-«Микровет». Нанесенный на внутреннюю поверхность пробирки мелкодисперсный антикоагулянтный порошок ЭДТА быстро растворялся в крови и надежно блокировал процессы свертывания крови(6).
  Определение групп крови и резус фактора (D антигена) производилось в крови, взятой из пальца у испытуемых-добровольцев. Всего в экспериментах приняли участие 28 испытуемых-добровольцев в возрасте от 20 до 60 лет обоих полов.
  Цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ и цоликлон анти-D супер большими каплями (0,1 мл) наносились на планшет с соотвитствующими надписями. Рядом с этими каплями наносились взятые образцы крови маленькими каплями (0,01-0,03 мл) и смешивались с реагентами. При легком покачивании планшета в течение 3 минут наблюдали за агглютинацией эритроцитов.
  Идентифицировав испытуемого-добровольца по его принадлежности к той или иной группе крови, мы приступали к исследованию крови методом ГРВ-графии. Кровь в количестве 20 мкл наносилась на стеклянную насадку шприца, заполненного физиологическим раствором (0,5 мл) для заземления(7). Каждую донорскую кровь измеряли на приборе по 10 раз. Все работы производились на одном и том же приборе ГРВ-камера в программе Capture. Вся статистическая обработка полученных данных производились в программах Video Analyzer, Statistica и Microsoft Excel.

Анализ и обсуждение данных
   Результаты серологических реакций по определению группы крови по системе АВ0 и резус фактора, полученные нами с участием испытуемых-добровольцев, сопоставлялись с результатами ГРВ-графии. 
   Экспериментальные данные обрабатывались с использованием значимых параметров динамических ГРВ-грамм  -  энтропии, фрактальности, СКО фрактальности, мощности временных рядов, а также экспоненциальных и полиномиальных коэффициентов аппроксимации временных рядов площади засветки и коэффициента формы. По другим параметрам (интенсивности,  длины изолинии и др.[8]) значимых результатов выявлено не было.
   Для удобства интерпретации данных были приняты следующие обозначения: деление испытуемых-добровольцев по половому признаку М (мужчины), Ж (женщины) и присвоение каждому лицу номера в каждой группе отдельно.
   В многопараметрическом пространстве указанных параметров был проведен кластерный анализ. На его основании были получены следующие результаты. В пространстве параметров временного ряда коэффициента формы (рис. 1) выявились четыре области. Первая из них представлена лицами со II группой крови (Ж2, Ж7, Ж9, Ж14, М1, М2, М7, М8, М9), так же в нее попал человек с I группой (М12). Всего в этой области 9 из 10 человек, имеющих II группу крови.
   Вторую область составили лица с I группой крови (6 из 9). А именно Ж5, Ж6, М4, М5, М6, М8.
Четыре испытуемых-добровольца с IV группой из шести составили третью область (Ж3, Ж10, Ж11, М11).
   В четвертой же области находятся лица с различными группами крови, не вошедшие ни в одну из первых трех областей (Ж1, Ж4, Ж13, Ж15, М3, М10, М12, М13).   
   В пространстве параметров временного ряда площади засветки (рис 2.) были выявлены три области, две из которых с резус-положительными лицами, одна – с резус-отрицательными. В группу резус-отрицательных вошли  Ж2, М3, М4, М9, остальные вошли в «положительные» группы.
 На основании полученных результатов, можно сделать выводы о том, что в многопараметрическом пространстве, образованном параметрами временных рядов коэффициента формы, имеет место тенденция к разбиению испытуемых-добровольцев по группам крови. Что касается резус фактора, то результаты обработки временных рядов площади засветки показали четкое разделение лиц на резус положительных и отрицательных.
   Стоит отметить, что в данной выборке различий ни по половым, ни по возрастным признакам выявить не удалось.
   Таким образом, при дальнейшем усовершенствовании техники измерения и лабораторных навыков использования ГРВ-графии в серологической практике как вспомогательного метода вполне обосновано.

Литература:

1.    Аграненко В.А., Скачилова Н.Н. Гемотрансфузионные реакции и осложнения. – М., 1986. 240с.
2.    Воробьев А.И. и др. Руководство по гематологии в 3 т. – М., 2002.
3.    Донсков С.И. Гематология и трансфузиология №5. – 2001. с. 32-33.
4.    Котоян Э.Р. Клиническая гематология. – М., 2003. 244с.
5.    Свиридов Л.П., Степанов А.В., Ахметели Г.Г. и др. Предварительные результаты изучения возможности регистрации реакции агглютинации с помощью метода газоразрядной визуализации. В мат. науч. конф. Современная микробиология – клинической медицине и эпидемиологии. – СПб., 2003. с. 32-33.
6.    Луговская С.А., Морозова В.Т. и др. Лабораторная гематология. – М.,2002.
7.    ГРВ Мини лаборатория. Инструкция по эксплуатации. – СПб., 2004.
8.    Коротков К.Г. Основы ГРВ биоэлектрографии, С-Пб, изд. ИТМО (ТУ), 2001.